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用甲醇活化不應超過15秒,太長時間會對pvdf薄膜造成損壞。找到一個盤子,倒入一定體積的純甲醇,用一把鑷子將薄膜的角包裹在純甲醇中,看到薄膜從不透明變為均勻半透明,大約需要5秒鐘。然后立即將無甲醇轉移溶液加入到板中,使甲醇的最終濃度為20%。可以將凝膠和膜以及濾紙轉移到膜上約30分鐘,并且在整個過程中將膜干燥。如果膜干燥,則需要重新激活。操作過程中注意不要劃傷薄膜或弄臟薄膜,否則在顯色后會有痕跡,判斷干擾結果。膜的孔徑也是需要考慮的問題。正常的大中等分子量蛋白質可以選擇為0.45μm,但是小分子量多肽需要0.22μm膜。尼龍膜和NC膜不需要活化。
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